人胰岛素样生长因子-1真核双顺反子表达载体pIRSES2-EGFP-hIGF-1的构建与鉴定

• 作者: 吕成昱 周峰 张海宁 王英振 续宗耀
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 人胰岛素样生长因子1 基因 载体 转染
• 年，卷（期）: 2013,（15）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2837-2840
• 分类号: Q75|Q78|R684.3
• 语种: 中文

摘要

目的:利用基因工程原理构建人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)全长基因的真核表达栽体pIRES2-EGFP-hIGF-1,并观察其在人胚肾293细胞中的表达.方法:应用PCR方法从人肝细胞文库中提取人hIGF-1全长cDNA序列,克隆入T-pMD18载体中,经测序证实序列正确后,利用XhoI/EcoRI进行双酶切并定向插入真核表达载体pIRES2-EGFP中,利用双酶切、电泳和PCR进行鉴定证实插入片段的正确性.应用高效转染试剂X-treme GENE HP DNA Transfection reagent介导真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1转染人胚肾细胞(HEK293),转染后利用倒置荧光显微镜与RT-PCR观察目的基因在靶细胞中的表达.结果:经酶切和测序证实重组质粒栽体构建正确,转染后48小时可观察到绿色荧光的表达,RT-PCR结果证实转染pIRES2-EGFP-hIGF-1后可有hIGF-1基因靶细胞中表达.结论:成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,目的基因与标记基因可同时在靶细胞中表达,为后续研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王英振	青岛大学医学院附属医院关节外科	128	711	15.0	21.0
2	张海宁	青岛大学医学院附属医院关节外科	70	224	8.0	11.0
3	吕成昱	青岛大学医学院附属医院关节外科	47	245	8.0	13.0
4	周峰	青岛大学医学院附属医院关节外科	8	19	3.0	4.0
5	续宗耀	青岛大学医学院附属医院关节外科	4	14	2.0	3.0