rAcAP5高表达工程菌株的筛选、多肽的制备、纯化及对栓塞性脑缺血的溶栓作用

• 作者: 刘晓岩 卜琦鑫 朱亚楠 朱元军 王银叶
• 来源期刊: 中国药学（英文版）
• 学科: 医学
• 关键词: 犬钩虫抗凝肽5 蛋白表达 纯化 溶栓
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 22-27
• 页数: 6页
• 分类号: R965
• 语种: 英文

摘要

犬钩虫抗凝肽5 (AcAP5)是一种具有抗凝活性的多肽.本实验室发现重组AcAP5 (rAcAP5)具有TAFIa抑制活性,并在体内、体外实验中均具有溶栓活性.本研究拟筛选rAcAP5高表达菌株,并用大鼠栓塞性MCAO模型来评价rAcAP5的溶栓作用.根据大肠杆菌偏爱密码子对编码AcAP5的目的基因进行了优化;用具有不同特点的6种表达质粒和11种大肠杆菌菌株构建了66种重组菌株,从中选出rAcAP5可溶性表达量最高的菌株；采用阴离子交换色谱和阳离子交换色谱来纯化目的蛋白;用高效液相色谱法测定纯化过的rAcAP5的纯度；通过飞行质谱测定所表达的rAcAP5的分子量;用大鼠栓塞性大脑中动脉阻塞(MCAO)模型评价溶栓作用.rAcAP5表达量最高的菌株是C2566H/pTYB1-rAcAP5,经过两步离子交换层析纯化之后,纯度达到90％,纯蛋白产量为28 mg/L.激光多普勒血流仪测定rCBF评价溶栓效果,给生理盐水(溶媒)后rCBF无明显变化,而给予rAcAP5 (50-200 μg/kg,i.v.)后,rCBF显著增加,剂量有依赖性,表明rAcAP5具有明显的溶栓作用.综上所述,我们筛选到rAcAP5的高表达菌株,表达、纯化并鉴定了该多肽,发现它在栓塞性MCAO模型上有明显的溶栓作用,提示它有可能作为溶栓剂或辅助溶栓剂应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王银叶		34	268	9.0	16.0
2	刘晓岩		25	119	7.0	10.0
3	朱元军		9	1	1.0	1.0
4	朱亚楠		2	1	1.0	1.0
5	卜琦鑫		1	0	0.0	0.0