重组人促红素的连续聚乙二醇化反应

• 作者: 吴园园 张向荣 张涤平 盛光阳 陈贤光 黄滨
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人促红素 聚乙二醇化 双缓冲液体系 连续反应方法
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 37-42
• 页数: 6页
• 分类号: Q514+.3
• 语种: 中文

摘要

为了达到提高重组人促红素(EPO)的聚乙二醇(PEG)化反应单取代率的目的,建立了一种EPO的连续PEG化反应方法.首先,对保存于4℃冰箱24个月的PEG-EPO反应液进行分析,结果表明其具有很好的长期稳定性.同时,圆二色谱(CD)测试结果显示,EPO在不同的缓冲液体系中,其蛋白质二级结构特征略有不同.接着,在不改变缓冲液体系的情况下,进行了EPO的直接二次PEG化反应;另外,采用双缓冲液体系,进行EPO的二次PEG化反应.结果表明,一次PEG化反应得到的PEG-EPO反应液体系具有很高的稳定性,不能直接进行二次PEG化反应;应用双缓冲液体系,则可实现EPO的连续PEG化反应,所得PEG-EPO反应液的单取代率高于54％.最后,采用双缓冲液体系,成功地进行了EPO的连续3次PEG化反应.对纯化得到的单取代产物(mono-PEG-EPO),进行了高效液相色谱、荧光光谱、电泳、唾液酸含量、体内活性以及PEG化修饰位点等测试.测试结果表明,EPO在经过连续3次PEG化反应后,仍然可以很好地保留其生物活性和蛋白质结构,同时其PEG化修饰位点也没有发生显著改变.这些研究结果为开发一种新型的高单取代率的EPO的PEG化反应方法提供了基础,有望降低PEG-EPO长效药物的制备成本.