拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和纯化

• 作者: 王永刚 马建忠 马燕林
• 来源期刊: 植物生理学报
• 关键词: 拟南芥 abi5 分子克隆 原核表达 纯化 质谱
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 185-191
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

拟南芥abi5基因编码了一个碱性亮氨酸拉链类转录因子,它在ABA信号转导过程中发挥着关键调控作用.本文以拟南芥为材料,通过RT-PCR扩增、克隆了包含abi5基因编码区的片段.核苷酸序列分析表明,所克隆的基因与NCBI数据库收录的abi5基因(GenBank登录号NM_129185.3)有99.0％的一致性;氨基酸序列存在4个残基差异.所克隆的abi5基因被进一步亚克隆至pET-32a表达载体.序列测定核实构建正确的重组质粒(pET32a-ABI5)转化入大肠杆菌BL21 Star (DE3)中诱导表达.表达产物经Ni-NTA亲和层析柱分离纯化、SDS-PAGE分析和质谱鉴定.结果表明,重组abi5基因在大肠杆菌表达的较适宜条件为:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度为0.3 mmol·L-1、30℃下诱导4h,可达到细菌裂解液上清蛋白的29.1％.经Ni-NTA亲和层析柱纯化后的ABI5融合蛋白在SDS-PAGE电泳分析时呈现一条蛋白带.该条带经串联质谱分析证明为重组ABI5融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王永刚		98	348	10.0	14.0
2	马建忠		40	94	6.0	8.0
3	马燕林		5	5	1.0	2.0