对虾6种病毒多重PCR检测方法的建立

• 作者: 刘飞 张宝存 张晓华 黄倢
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: WSSV IHHNV HPV TSV BP IMNV 多重 PCR
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 60-67
• 页数: 8页
• 分类号: S917.1
• 字数: 5161字
• 语种: 中文

摘要

本研究针对养殖对虾6种病毒,包括白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、肝胰腺细小病毒(HPV)、桃拉综合征病毒(TSV)、对虾杆状病毒(BP)和传染性肌肉坏死病毒(IMNV),选择各自的基因分别设计特异性引物和探针,首先进行了单一病毒的PCR验证,在此基础上建立了同时特异性检测6种对虾病毒的多重PCR检测体系.对反应条件进行优化并进行特异性和灵敏度的验证.50μ1反应体系,Mg2+的最佳浓度为5mmol/L,ExTaq酶最佳用量为3.75U,反应程序中最佳退火温度为55.5℃.6种病毒之间以及与对虾基因组都存在很好的特异性.最终经试验验证,该系统的检测灵敏度对WSSV可达10 4拷贝,IHHNV可达102拷贝,HPV可达104拷贝,TSV可达103拷贝,BP可达10 5拷贝,IMNV可达10 5拷贝.虽然该多重PCR方法灵敏度不如单一的PCR检测高,但是通过实际样品检测验证了该方法省时、消耗较少,又不失准确性,在实际应用中具有可靠性和应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张晓华	中国海洋大学海洋生命学院	59	630	15.0	23.0
2	黄倢	农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所	36	490	13.0	21.0
3	刘飞	中国海洋大学海洋生命学院	4	59	4.0	4.0
7	张宝存	农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所	2	35	2.0	2.0