CryⅢA基因植物表达载体构建及马铃薯遗传转化

• 作者: 司怀军 吴家和 尤佳 张宁 文义凯 王蒂
• 来源期刊: 草业学报
• 学科: 农学
• 关键词: In-Fusion CryⅢA基因 表达载体 马铃薯 遗传转化
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 248-256
• 页数: 9页
• 分类号: S435.32|Q943.2
• 字数: 7493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11686/cyxb20140130

摘要

利用In-Fusion技术将酶切位点不匹配、目的基因内部含载体酶切位点的CryⅢA基因和植物表达载体pBI121相连接,分别成功构建了组成型启动子CaMV 35S和马铃薯茎叶特异表达启动子ST-LS1驱动的CryⅢA基因植物表达载体.利用冻融法将2个重组质粒转入根癌农杆菌LBA4404,转化马铃薯栽培品种陇薯3号和甘农薯2号获得了转化植株,经卡那霉素筛选和PCR检测,共有10株阳性植株CryⅢA基因成功整合到马铃薯基因组中.经实时荧光定量PCR检测表明,CryⅢA基因在CaMV 35S驱动的CryⅢA转基因植株的根、茎、叶中均有表达,且在叶中表达量较高,茎和根次之;在马铃薯茎叶特异表达启动子ST-LS1驱动的CryⅢA转基因植株中,在根中未见表达,仅在茎、叶中表达,且在叶中表达量较高.