日本血吸虫醛糖还原酶基因RNA干扰效应的初步研究

• 作者: 刘建 徐斌 王吉鹏 王树奇 胡薇
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 醛糖还原酶 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-21
• 分类号: R383.24
• 语种: 中文

摘要

目的 研究siRNA诱导的日本血吸虫醛糖还原酶(SjAR)基因转录本和蛋白水平的RNA干扰(RNAi)效应. 方法 设计并合成2条针对SjAR基因的siRNA(siRNA-1和siRNA-2)和1条阴性对照siRNA(siRNA-NC).用日本血吸虫尾蚴感染4～～6周龄雌性昆明鼠(800～～1 000条/鼠),13 d后灌注小鼠肝门静脉收集童虫,每(120±10)条童虫为一组,分别采用电转法和浸泡法对各组童虫进行RNAi处理.电转处理法:向电击杯中分别加入5 μg siRNA-1、siRNA-2、siRNA-NC或等体积的焦碳酸二乙酯(DEPC)水(空白对照),经125 V 20 ms方波脉冲电击童虫1次后,继续培养48 h；浸泡处理法:向童虫培养基中加入siRNA-1、siRNA-2或siRNA-NC溶液至siRNA浓度为200 nmol/L,第3天时更换一半新鲜培养基并补充siRNA,共培养5d.每处理设3个平行对照组.干扰结束后,采用TRIzol法提取虫体RNA和可溶性总蛋白,将RNA反转录为cDNA,以SjGAPDH基因为内参,实时定量PCR检测SjAR转录本相对表达水平的变化,Western blotting分析jAR蛋白水平的变化. 结果 实时定量PCR结果显示,采用siRNA-1、siRNA-2和siRNA-NC电转后,虫体jAR转录本水平分别为(90.6±16.2)％、(84.2±7.3)％和(105.9±10.3)％,与空白对照组[(100.9±16.8)％]的差异均无统计学意义(P＞0.05)；使用siR-NA-1、siRNA-2浸泡后,SjAR转录本水平为(48.6±8.2)％和(73.4±4.7)％,均较空白对照组[(100.0±3.3％)]显著下降(P＜0.01),而阴性对照siRNA-NC浸泡后的虫体SjAR转录本的表达水平为(101.43±14.33)％,与空白对照组比较表达差异无统计学意义(9＞0.05).Western blotting分析和条带定量结果显示,以空白对照组为标准,使用siRNA-1、siRNA-2和siRNA-NC浸泡后,SjAR蛋白水平分别为79.0％、97.8％和103.2％. 结论 使用浸泡法对日本血吸虫童虫SjAR进行RNAi处理可降低靶基因转录本和蛋白的表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡薇	复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系	10	70	5.0	8.0
5	王吉鹏	复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系	2	10	2.0	2.0
6	徐斌	中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所	4	14	2.0	3.0
7	王树奇	复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系	1	7	1.0	1.0
8	刘建	复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系	1	7	1.0	1.0