不同倍性泥鳅鳍细胞系的建立及生物学特性分析

• 作者: 刘博 吴迪 李雅娟 李霞 白丽雯 秦艳杰 马辰
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 泥鳅 细胞系 多倍体 生物学特性
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 150-157
• 页数: 8页
• 分类号: Q178.1|S917.4
• 字数: 6207字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2014.20

摘要

采用组织块培养法启动二倍体、三倍体和四倍体泥鳅鳍组织细胞原代培养,采用胰蛋白酶消化法传代,目前二倍体、三倍体和四倍体细胞已经分别传至59代、68代和68代。三种细胞均为成纤维细胞样细胞。鳍组织无菌处理方法是：先用质量浓度为10%的碘伏浸泡15min；后用青霉素和链霉素的混合液(500 IU/mL青霉素,500μg/mL链霉素)浸泡30min；原代培养和早期传代培养所用的培养基为DMEM/F12,添加体积分数为20%的胎牛血清、10 ng/mL人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、20 ng/mLI型胰岛素样生长因子(IGF-I)以及10μg/mL硫酸软骨素。30代以后所用培养基为20% FBS-DMEM/F12。细胞培养在25℃、5% CO2培养箱中。在此条件下,二倍体、三倍体和四倍体的倍增时间分别为48.43h、36.01h和41.45h；二倍体、三倍体和四倍体的特征染色体数目分别为50条、75条和100条；测定的二倍体、三倍体和四倍体细胞及核的体积比分别为1︰1.37︰2.37和1︰1.53︰1.97；细胞经液氮冷冻保存60d 后,解冻复苏后测定存活率分别为(80.88±1.38)%、(84.48±1.13)%、(81.57±1.28)%。不同倍性的泥鳅细胞系的建立丰富了鱼类细胞系的种类,为揭示多倍体鱼类生长、遗传等机制打下基础。