鸭梨果胶甲酯酶基因反义表达载体的构建及转化

• 作者: 李会宣 李桂琴 许冬倩 闫洪波 齐靖
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 鸭梨 果胶酯酶 反义表达载体 转化
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 597-604
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2014.04.0597

摘要

果胶酯酶(pectin methylesterase,PME)催化细胞壁中多聚半乳糖醛酸的脱甲酯化,可以降解植物细胞壁中的果胶多糖而与果实软化有关.本研究根据白梨果胶酯酶基因PcPME4的序列,设计一对含有特定酶切位点的特异性引物,以鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)cDNA为模板通过PCR扩增得到一段294bp的PME基因片段.将片段反向插入植物表达载体pBI121的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,经限制性酶切分析和测序分析证明成功构建PME基因的反义表达载体pBI121-AsPME.将pBI121-AsPME电转化农杆菌EHA105,利用含pBI121-AsPME的农杆菌工程菌液侵染鸭梨外植体后于抗性培养基中诱导愈伤组织,获得的抗性愈伤组织经PCR初步检测含有反向PME基因片段,荧光定量PCR检测结果显示受侵染的愈伤组织中PME基因表达量降低,表明反向插入的PME基因片段起到了抑制内源基因表达的效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	齐靖	河北经贸大学生物科学与工程学院	7	15	3.0	3.0
2	李会宣	河北经贸大学生物科学与工程学院	15	73	5.0	8.0
3	李桂琴	河北经贸大学生物科学与工程学院	39	209	8.0	13.0
4	闫洪波	河北经贸大学生物科学与工程学院	22	51	4.0	5.0
5	许冬倩	河北经贸大学生物科学与工程学院	12	60	4.0	7.0