十字花科黑腐病菌Ⅲ型效应物基因avrACXcc8004推测的启动子区

• 作者: 吴小建 吴秋菊 姜伯乐 杨丽超 梁晓夏 王凛 蒋国凤 阳丽艳
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 十字花科黑腐病菌 Ⅲ型效应物 HrpX avrACXcc8004 PIP-box -10 box
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 159-166
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

[目的]十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc),能侵染所有十字花科植物,引起黑腐病.Xcc通过Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ Secretion System,T3 SS)将Ⅲ型效应物(T3SS effector,T3 SE)蛋白直接转运到植物细胞内,T3SEs对于病原菌致病性至关重要.许多已鉴定的T3SEs基因的启动子区都存在植物诱导启动子盒(Plant-inducible promoter,PIP-box)和-10 box,但PIP-box及-10 box与经典的启动子-10区及-35区之间的关系如何未见报道,-10 box的序列保守性如何也未见报道.本研究旨在对T3SE基因avrACXcc8004推测的启动子区进行研究.[方法]首先,通过5'RACE确定其转录起始位点,接着用Fusion PCR对-10 box TACGTT序列中倒数第二个碱基T进行点突变为A/C/G,即:TACGAT、TACGCT和TACGGT,构建GUS融合报告菌株,定量测定GUS酶活.[结果]5'RACE结果显示avrACXcc8004的转录起始位点为A,对比分析得到启动子的-35区位于PIP-box之后8 bp处,而-10区与-10 box重叠;avrA CXcc8004启动子区的PIP-box和-35区、-10 box的整个模体为:TTCAC-N15-TTCGC-N8-TTGATG-N18-TACGTT.最后,GUS定量测定结果表明,突变为C时(TACGCT)的菌株的GUS酶活最高,突变为G时(TACGGT)的酶活增高最少.在△hrpX和△hrpG中的GUS酶活均比在Xcc 8004中有显著的降低.[结论]Xcc的T3 SE基因PIP-box 与-35区前后相衔,-10 box即-10区,-10 box对于avrACXcc8004的转录活性有较大的影响,-10 box突变前后avrACxcc8004均受HrpG和HrpX正向调控.