利用表面活性剂介导的方法制备AgrC蛋白脂质体

• 作者: 权春善 李西会 王丽娜 瞿晓晶 范圣第 许永斌
• 来源期刊: 化学学报
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 AgrC 表面活性剂 蛋白脂质体 膜蛋白
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 233-240
• 语种: 中文
• DOI: 10.6023/A13111123

摘要

膜蛋白AgrC是金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统的感受激酶.其信号转导机制的阐明对于解决细菌耐药问题具有重要意义.目前膜蛋白研究的主要瓶颈是难以获得大量高纯度和功能稳定的蛋白.将目标蛋白表达在大肠杆菌体内,利用表面活性剂将其从细胞膜上溶解,纯化,这一系列步骤容易引起膜蛋白不稳定和功能损失.本文报道了用表面活性剂介导的方法将膜蛋白AgrC镶嵌到(脂)质体上,即形成蛋白脂质体.脂质体和蛋白脂质体的结构、形貌以及平均粒径分别用透射电镜和动态光散射仪表征.蔗糖密度梯度离心的结果表明蛋白重构效率达80％.硫醇试剂标记实验确定AgrC的细胞质域在脂质体中取向于内侧.体外磷酸化实验表明AgrC蛋白在脂质体中的自我磷酸化活性远远高于表面活性剂中的活性,且其自我磷酸化活性在2周内几乎没有损失.蛋白脂质体的构建不仅解决了膜蛋白的不稳定性问题,也为体外研究AgrC蛋白的结构、功能和信号转导机制提供了新的思路.