类弹性蛋白和内含肽融合表达纯化重组人防御素3

• 作者: 刘文俊 吴倩 夏晓莉 孙怀昌 张鑫宇 徐碧 高慧
• 来源期刊: 扬州大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 类弹性蛋白 内含肽 人β防御素3 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 页码范围: 1-5,9
• 页数: 6页
• 分类号: Q516
• 语种: 中文

摘要

为建立简单、经济的重组人β防御素3(HBD3)制备方法,将HBD3序列插入类弹性蛋白(ELP)与ΔI-CM内含肽融合表达载体,将重组载体转化大肠杆菌,20℃下用IPTG诱导融合蛋白表达,在优化条件下进行相变循环,用内含肽自裂解活性释放目的蛋白,用琼脂扩散和最小抑菌浓度法测定重组HBD3抗菌活性.结果表明:融合蛋白在重组菌中获得可溶性表达,第1轮相变循环的纯度为85.7％,再次相变循化的纯度达93.1％;内含肽裂解温度为28℃,孵育12h裂解效率达90.3％;重组HBD3回收率达74.8％,产量为0.98 mg· L-1,纯度为92.6％,内毒素含量低于0.03 U·mg-1(蛋白),对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有显著的抑菌活性.说明基于ELP相变循化和内含肽自裂解的重组蛋白表达与纯化系统可用于重组HBD3的规模化制备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌		138	1042	15.0	25.0
2	刘文俊		8	20	3.0	4.0
3	张鑫宇		40	142	6.0	10.0
4	夏晓莉		24	78	6.0	8.0
5	高慧		46	96	5.0	8.0
6	吴倩		5	13	1.0	3.0
7	徐碧		1	0	0.0	0.0