达托霉素产生菌玫瑰孢链霉菌NRRL11379接合转移系统的建立与优化

• 作者: 吴旻 彭冉 王文轶 王旻 王航
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 玫瑰孢链霉菌NRRL11379 达托霉素 pSET152 电转化 属间接合转移 优化
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 194-198
• 页数: 5页
• 分类号: R978.1
• 语种: 中文

摘要

玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)NRRL11379是一种具有环脂肽结构抗生素-达托霉素(Dapto-mycin)的产生菌.建立高效稳定的遗传操作系统是研究该链霉菌各功能基因作用以及构建基因工程菌的基础.实验探索了通过电穿孔、接合转移向玫瑰孢链霉菌中转入外源DNA的可能性.以链霉菌(Streptomyces)噬菌体ΦC31所构建的整合型载体pSET152-dptP为出发质粒,玫瑰孢链霉菌NRRL11379新鲜菌丝体作为受体菌,在不同的电场强度下进行电穿孔实验,结果表明:以玫瑰孢链霉菌NRRL1 1379新鲜菌丝体为受体菌,未获得转化子.以ET12567(PUZ8002,pSET152-dptP)为供体,玫瑰孢链霉菌NRRL11379新鲜菌丝体为受体,选取MS培养基为接合转移培养基,利用属间接合转移将质粒pSET152-dptP转入菌株NRRL11379中.结果表明:当供体大肠杆菌ET12567细胞量和玫瑰孢链霉菌NRRL11379菌丝体量比例为1∶1,MS培养基中MgCl2的浓度为0.01 mol/L,培养20 h后覆盖阿泊拉霉素50 μg/mL以及萘啶酮酸50 μg/mL时,接合转移频率最高,可达1.75×10-4.通过PCR验证,质粒pSET152-dptP已整合至玫瑰孢链霉菌NRRL11379菌株的染色体上.确定了玫瑰孢链霉菌属间接合转移的最佳条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王旻		170	1536	20.0	32.0
2	王文轶		4	18	2.0	4.0
3	吴旻		8	42	3.0	6.0
4	王航		4	4	1.0	2.0
5	彭冉		1	0	0.0	0.0