中国野生山葡萄VaERD15基因的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 张剑侠 李瑞民 牛茹萱 翟焕
• 来源期刊: 西北林学院学报
• 关键词: 中国野生葡萄 山葡萄 VaERD15 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 林木遗传育种与培育
• 页码范围: 100-105
• 页数: 6页
• 分类号: S722.36
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-7461.2014.06.19

摘要

为探索中国野生山葡萄(Vitis amurensis)抗寒相关基因的抗寒作用机理,以中国野生山葡萄抗寒基因cDNA文库筛选的VaERD 15基因(V.amurensis early responsive to dehydration 15)cDNA为模板,采用PCR扩增获得VaERD15基因的开放阅读框为423 bp;通过构建pGEX-6p-1/VaERD15原核表达载体并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,经IPTG诱导表达出32.2 kD的融合蛋白GST-VaERD15.该融合蛋白主要以包涵体表达形式存在,经0.1 mmol·L-1IPTG于37℃下诱导4h,其表达量最大;进一步用电透析法纯化融合蛋白,以纯化产物免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测结果表明其抗原-抗体免疫反应良好,获得的多克隆抗体能够用于VaERD15基因的功能分析.