肺癌细胞条件培养液活化Notch通路促进破骨细胞分化

• 作者: 刘复州 初同伟 周跃 张超 沈伟伟 王汝杰 胡旭 黄晨
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 破骨细胞 受体,Notch 细胞分化 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 216-222
• 页数: 7页
• 分类号: R734.2|R730.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.03.004

摘要

目的:体外检测肺腺癌A549细胞条件培养液(conditioned medium,CM)对人外周血CD14+单核细胞破骨分化和增殖的影响,探讨Notch通路相关因子在其中所起的作用.方法:用含巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)的α-MEM细胞培养液培养健康成人外周血CD14+单核细胞,作为对照组;用M-CSF和人肺腺癌A549细胞CM培养人外周血CD14+单核细胞,作为A549 CM组;用M-CSF、A549细胞CM和γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸t-丁酯[N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT}培养人外周血CD14+单核细胞,作为DAPT组.各组均在培养6d后加入核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-1cB ligand,RANKL)继续培养.实时荧光定量-PCR法检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)、降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)及Notch靶基因HES-1、HEY-1的mRNA表达;TRAP染色法检测破骨细胞形成;扫描电子显微镜下观察破骨细胞溶骨功能;免疫荧光法检测Notch活性片段NICD的表达情况;CCK-8法检测CD14+单核细胞增殖情况.结果:A549 CM 组TRAP、CK和CTR表达水平以及TRAP+多核细胞数、溶骨面积和细胞核内Notch活性片段NICD的荧光强度均较对照组明显上调(P＜0.05),而DAPT组较A549 CM组明显下调,但仍高于对照组(P＜0.05); A549CM组HES-1和HEY-1 mRNA的表达水平明显高于DAPT组和对照组(P＜0.05),后2者无明显差异;A549CM组细胞增殖率高于对照组,而DAPT组的细胞增殖率最高.结论:肺腺癌A549 CM可能通过活化Notch通路,促进CD14+单核细胞向破骨细胞分化;同时Notch通路活化可抑制CD14+单核细胞增殖.