烟草糖基转移酶基因NtGT5a的克隆及原核表达

• 作者: 付强 任学良 林世锋 赵杰宏 邹颉 郭玉双 钟晓武
• 来源期刊: 烟草科技
• 学科: 工学
• 关键词: 烟草 糖基转移酶 基因 蛋白酶
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 烟草农学
• 页码范围: 69-74,84
• 页数: 7页
• 分类号: TS413
• 字数: 4165字
• 语种: 中文

摘要

为揭示烟草糖基转移酶的活性及生物学功能,从烟草栽培品种中克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT5a,基于GenBank的烟草糖基转移酶基因NtGT5a的核苷酸序列(GenBank登录号AB176523),设计并合成特异性引物,以红花大金元叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得了烟草糖基转移酶基因NtGT5a的cDNA片段.序列分析表明,该基因编码区为1458 bp,编码485个氨基酸残基,推测的蛋白分子量为54.21 kDa,理论等电点为5.41.通过构建重组表达载体pCold-SUMO-NtGT5a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在15℃下经0.2 mmol/L IPTG诱导22 h表达产生了SUMO-NtGT5a重组蛋白.重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在.将重组蛋白的可溶性组分经过Ni-NTA柱层析纯化和凝胶过滤层析,用SUMO蛋白酶切除SUMO标签,再用镍柱纯化获得了高纯度的NtGT5重组蛋白.