土壤蜡蚧轮枝菌DNA提取方法的改进及其应用效果

• 作者: 周洁 张艳军 谢明 贾开志
• 来源期刊: 中国生物防治学报
• 学科: 农学
• 关键词: 蜡蚧轮枝菌 DNA提取 PCR 虫生真菌
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 828-833
• 页数: 6页
• 分类号: S476
• 字数: 5867字
• 语种: 中文

摘要

土壤真菌分子生态学研究需要大量和高效地提取真菌的 DNA。应用市售的一般试剂盒提取土壤虫生真菌DNA，常常存在得率和质量低的问题，甚至根本提取不到土壤真菌的DNA样品。针对这一问题，本研究对细胞破碎方式及后续DNA提取参数进行了一系列的改进和优化，建立了一套针对性的提取方法。该提取法对虫生真菌—蜡蚧轮枝菌纯培养物的灵敏度极高，可在10个孢子的条件下提取到DNA，而市售的试剂盒则不能提取到（试剂盒在107个孢子条件仍提不到DNA）；该提取法对人工投菌土样的DNA提取灵敏度达到102个孢子/克土，所得的DNA纯度高，无明显抑制后续PCR扩增的物质；施用过蜡蚧轮枝菌的田间土样所得 DNA 样品可成功扩增出蜡蚧轮枝菌特异片段，而未施用过蜡蚧轮枝菌的田间土样所得DNA 样品不能扩增出蜡蚧轮枝菌特异片段。本提取方法具有灵敏度和纯度高的特点，适用于土壤虫生真菌的分子生态学样品制备。