牛副流感病毒3型NP基因原核表达及纯化

• 作者: 曹丽 温永俊 高维凡
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 牛副流感病毒3型 NP基因 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 20-28
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.5|Q786
• 字数: 6835字
• 语种: 中文

摘要

旨在对牛副流感病毒3型(BPIV3) NP基因进行分段克隆及原核表达,获得纯化蛋白.根据GenBank中公布的牛副流感病毒3型NP蛋白基因序列(JQ063064)设计合成2对特异性引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,以牛胚肾细胞(MDBK)培养的BPIV3 NM09株病毒液提取的RNA为模板,扩增获得2段NP基因序列(NP1、NP2),将2个片段克隆到PGEX-6P-1表达载体,构建具GST标签的重组质粒PGEX-NP1、PGEX-NP2,将2种阳性重组质粒分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3),优化诱导表达条件进行可溶性分析,并用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定,同时利用亲和层析法将重组蛋白纯化.最终获得大小分别为42.3 ku、38.5 ku的重组蛋白,其中PGEX-NP1为包涵体表达,PGEX-NP2为可溶性和包涵体2种表达形式,因PGEX-NP2蛋白疏水性强、等电点较高,其蛋白大小比理论值偏大;Western blot结果显示2种重组蛋白都具有良好的反应原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	温永俊	中国农业科学院特产研究所	25	169	7.0	11.0
2	高维凡		14	105	6.0	10.0
3	曹丽		2	9	2.0	2.0