斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)LEAP2成熟肽在大肠杆菌中的融合表达

• 作者: 陶妍 高北
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 斑点叉尾鮰 LEAP2成熟肽 RT-PCR 融合表达
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 130-135
• 语种: 中文

摘要

以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)肝脏为基因克隆的材料,通过RT-PCR对编码LEAP2成熟肽区域41个氨基酸的cDNA片段( mLEAP2)进行克隆.根据斑点叉尾鮰与其他鱼类、哺乳动物及两栖动物等其他物种LEAP2成熟肽区域氨基酸序列的比对结果,发现存在14个保守的氨基酸残基,其中4个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽的羧基端区域,在空间上可形成两对二硫键,推测与LEAP2的抗菌活性有关.进一步构建重组表达质粒pET32a-mLEAP2,使mLEAP2基因与携带有6×His-tag标签和肠激酶识别位点的硫氧还蛋白trxA基因融合,转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,在25℃下,经0.7 mmol/L IPTG诱导培养16 h后,成功表达了trxA-mLEAP2融合蛋白.Tricine-SDS-PAGE显示,细胞经超声破碎后,上清和沉淀中均含融合蛋白,采用固化金属离子亲和层析(IMAC)对其进行纯化,得到了纯化的融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶妍	上海海洋大学食品学院	34	379	6.0	19.0
2	高北	上海海洋大学食品学院	3	8	2.0	2.0