人vasorin蛋白的基因克隆、表达及纯化

• 作者: 丁红梅 刘农乐 房涛 李少华 李慧 李洁 王玮 苏雪婷 赵强 邵宁生 黄皑雪
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人vasorin蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 38-41
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3867字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.01.009

摘要

目的：克隆、表达人vasorin（VASN）蛋白。方法：利用PCR方法从HepG2细胞的cDNA中扩增获得目的基因，并插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET28a中，构建重组表达质粒pET28a-VASN，将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后目的基因获得表达，对融合目的蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果：内切酶鉴定及基因序列测定证实重组表达质粒构建成功；对目的蛋白进行了原核表达，SDS-PAGE显示相对分子质量为61×103的特异表达条带；Western印迹证实目的蛋白为VASN，且主要以包涵体形式存在；对经尿素变性的表达产物进行了亲和层析纯化，有利于以后的变性、复性过程。结论：获得了人VASN融合蛋白，为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。