犬瘟热病毒磷蛋白的表达及抗体制备

• 作者: 周圻 张敏 梅匀安 王晓杜 袁庄川
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 犬瘟热病毒 磷蛋白 原核表达 病毒感染 细胞定位
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 495-501
• 页数: 7页
• 字数: 5939字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.04.013

摘要

犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)是一种急性高度接触性传染病病原,可引起犬(Canis)、猫(Felis)等多种属动物发热、腹泻、肺炎和中枢神经系统紊乱,其磷蛋白(phospho-protein,P)在病毒复制和致病中具有重要作用.本研究根据犬瘟热病毒P蛋白基因(GenBank No.AF 164967)设计引物,RT-PCR扩增得到CDV-P基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-CDV-P,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)菌株,异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达重组his-CDV-P蛋白,His-band纯化后获得高纯度重组蛋白,纯化蛋白免疫balb/c小鼠,制备了小鼠抗CDV-P抗体,检测CDV感染细胞内P蛋白的表达和细胞定位,检测不同感染时间细胞内P蛋白的表达.SDS-PAGE电泳结果表明,获得重组蛋白的分子量大小为65 kD,表达的蛋白以包涵体形式存在,占总菌体蛋白的35％以上,纯化后占总蛋白60％以上;Western blot检测表明,小鼠抗CDV-P抗体能特异性识别原核表达产物和病毒感染表达产物,CDV-P在感染细胞内具有两种表现形式(磷酸化和非磷酸化);间接免疫荧光结果显示,该蛋白在胞浆和胞核中都存在;CDV-P在病毒感染的早期和晚期都有表达,随着感染时间延长表达逐渐增加,并且其磷酸化水平也逐渐增加.本研究制备了重组P蛋白和多克隆抗体,检测了P蛋白在感染细胞内的表达和定位,为P蛋白功能和CDV致病机理研究提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晓杜	浙江农林大学动物科技学院	20	68	4.0	7.0
2	梅匀安	浙江农林大学动物科技学院	3	10	2.0	3.0
3	袁庄川	浙江农林大学动物科技学院	3	10	2.0	3.0
4	周圻	浙江农林大学动物科技学院	9	48	4.0	6.0
5	张敏	浙江农林大学动物科技学院	9	42	5.0	6.0