艰难梭菌毒素B羧基端的表达与卵黄抗体制备

• 作者: 仲晓宁 冯东晓 刘红 宋少峰 徐从伦 成岩 赵志伟 邢平平 马惠文
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 艰难梭菌毒素B羧基端 原核表达 卵黄抗体
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 33-37
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 3791字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.01.008

摘要

目的：在大肠杆菌中可溶性表达艰难梭菌毒素B羧基端（TcdB-c），免疫产蛋鸡，获得针对TcdB-c的卵黄抗体（IgY）。方法：人工合成TcdB-c的基因，将其克隆至pET32b（+）载体中，转化大肠杆菌BL21（DE3），诱导表达产物经金属螯合层析纯化，凝血酶酶切后得到目的蛋白TcdB-c；利用兔红细胞凝集和兔肠袢实验检测目的蛋白活性，用TcdB-c免疫产蛋鸡制备鸡卵黄抗体，分离纯化卵黄抗体并经ELISA测定抗体效价，用兔肠袢实验检测抗体的中和活性。结果：构建了TcdB-c的重组表达载体，诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为79000，经凝血酶酶切后的相对分子质量约65000；目的蛋白免疫产蛋鸡后获得效价为1∶20000的抗TcdB-c卵黄抗体，且该抗体可以中和TcdB-c对兔小肠的毒性作用。结论：获得了具有生物学活性的TcdB-c，并制备了针对TcdB-c的鸡卵黄抗体，为利用基因工程方法防治艰难梭菌感染打下了基础。