采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法单管同时检测JAK2V617F突变和JAK2外显子12突变

• 作者: 关明 吴之源 张心菊 张瑾 胡婷婷 许笑 陈宇明
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: Janus激酶2 外显子 突变 多重聚合酶链反应 高分辨率熔解曲线 红细胞增多症,真性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 194-197
• 页数: 4页
• 字数: 2983字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.03.008

摘要

目的 建立能单管同时检测JAK2 V617F突变和外显子12突变的方法.方法 以PC-3细胞株DNA为野生型对照,分别以HEL细胞株DNA和含有JAK2外显子12突变的质粒作为JAK2V617F突变和外显子12突变的阳性对照,采用多重PCR扩增不同DNA片段,并结合高分辨熔解曲线法建立检测JAK2V617F和外显子12突变的联合检测体系.同时选取42例真性红细胞增多症患者,分别采用上述方法和常规方法在外周血中检测JAK2的2种突变.结果 采用多重PCR结合高分辨熔解曲线法成功建立了JAK2突变联合检测体系,能够同时检测JAK2V617F突变和外显子12突变,2种突变的检测灵敏度皆可达5％,2种扩增片段的溶解温度(Tm)的批间及批内变异系数都小于0.01％.42例真性红细胞增多症患者中,发现37例携有JAK2V617F突变,在5例JAK2V617F突变阴性真性红细胞增多症病例中检出2例JAK2外显子12突变.与常规方法相比,结果符合率达到100％.2例JAK2外显子12突变经克隆测序确认突变类型为H538K539delinsL和F537-I546dul10+F547L.结论 该方法可同时在外周血中检测出JAK2的2种突变,将有助于对骨髓增殖性肿瘤尤其是真性红细胞增多症的分子诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张瑾	浙江省台州市立医院检验科	14	68	3.0	8.0
2	关明	复旦大学附属华山医院中心实验室	105	460	10.0	15.0
3	陈宇明	复旦大学附属华山医院检验科	24	97	6.0	8.0
4	张心菊	复旦大学附属华山医院中心实验室	21	145	7.0	11.0
5	吴之源	复旦大学附属华山医院检验科	4	16	2.0	4.0
6	胡婷婷	复旦大学附属华山医院检验科	13	48	3.0	6.0
7	许笑	复旦大学附属华山医院中心实验室	6	19	3.0	4.0