罗非鱼源无乳链球菌溶血素基因体外表达及其免疫原性

• 作者: 吴灶和 李桂欢 汤菊芬 王培 王蓓 简纪常 鲁义善
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 无乳链球菌 溶血素 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 60-67
• 页数: 8页
• 分类号: S917
• 字数: 5391字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20140609

摘要

为研究罗非鱼源无乳链球菌溶血素(Hemolysin, Hly)对鱼体的免疫保护作用，根据已获得的无乳链球菌ZQ0910全基因组序列设计引物扩增hly基因，定向克隆于原核表达载体pET-28a中，构建原核重组质粒pET-28a-hly，经IPTG诱导表达后，制成亚单位疫苗免疫吉富罗非鱼，并分析疫苗的免疫保护力。结果显示，hly基因产物大小1335 bp，编码444个氨基酸，经测序与GenBank报道的链球菌属Hly氨基酸序列同源性可达99%。经IPTG诱导表达后，SDS-PAGE分析可见一条51.7 kD的特异条带；Western blotting分析结果说明表达的Hly蛋白能与His-Tag单抗特异性结合；制备的亚单位疫苗免疫鱼体后第14天即可检测到抗体产生，并在第28天达到峰值，抗体效价为1∶4096，免疫保护率为70%。由此证实，该亚单位疫苗有望成为预防由无乳链球菌引起的罗非鱼链球菌病的基因工程类疫苗。