TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的原核表达及其在舞毒蛾幼虫体内的跨膜转导

• 作者: 周洲 曲良建 李永丽 源春彦
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 舞毒蛾 滞育激素 TAT穿膜肽 蛋白转导域 融合蛋白 跨膜运输
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 1361-1367
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

[目的]为了探究滞育激素经昆虫取食的生物效应,需设计一种能够加速跨膜运输的融合蛋白,克服经昆虫消化道的降解作用.[方法]本研究以分月扇舟蛾Clostera anastomosis滞育激素基因Cloan-DH和TAT穿膜肽编码序列为基础,构建TAT-Cloan-DH融合基因;然后以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)为标签,构建在pET-22b载体中.在0.2 mmol/L IPTG诱导下,在大肠杆菌Escherichia coli BL21 Rosetta(DE3)中表达出TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白.再分别将表达有TAT-Cloan-DH-EGFP和EGFP融合蛋白的大肠杆菌BL21菌体拌入人工饲料,经舞毒蛾Lymantria dispar幼虫持续取食0,8,24,48,72和90h后,随机挑选试虫进行组织固定并制作石蜡切片,选取中肠所在体段切片进行组织荧光分析.[结果]37℃0.2mmol/L IPTG诱导条件下,表达的TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的分子量为61 kD,主要以包涵体形式表达,融合蛋白约占细胞总蛋白含量的18.1％;随着试虫取食含TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白饲料的增加,虫体组织的绿色荧光强度逐渐增加,取食72h后,组织荧光强度达到最高.[结论]实验结果说明融合蛋白TAT-Cloan-DH-EGFP可以通过消化道横向跨膜运输,到达虫体其他组织,且该过程与蛋白的摄入量成比例.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周洲	河南科技大学林学院	22	85	5.0	8.0
2	曲良建	中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所	29	270	8.0	15.0
3	李永丽	河南科技大学林学院	18	51	4.0	6.0
4	源春彦	河南科技大学林学院	2	5	1.0	2.0