靶向血管平滑肌细胞TLR4基因小干扰RNA载体构建及效果评价

• 作者: 富华颖 崔丽 李广平 焦占全 王兴华
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: Toll样受体4 RNA干扰 RNA,小分子干扰 肌,平滑,血管 逆转录聚合酶链反应 免疫印迹法
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 113-115
• 页数: 3页
• 分类号: R54
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2014.02.005

摘要

目的：设计合成有效的靶向Toll样受体4（TLR4）基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体，并筛选出TLR4基因稳定沉默的血管平滑肌细胞（SMC）。方法依据RNA干扰（RNAi）序列设计原则，以TLR4基因为靶基因，合成3对小发夹RNA（shRNA）寡核苷酸链，经退火、与线性化pSilence 2.1-U6 neo质粒连接，酶切及测序进行鉴定。脂质体法转染血管SMC，新霉素（G418）加压筛选并收集稳定表达质粒的SMC。RT-PCR及Western blot法检测收集的SMC中TLR4 mRNA和蛋白表达，以确定siRNA对TLR4的抑制效率。结果测序鉴定插入的发夹样序列正确，成功构建了TLR4基因siRNA表达载体；并获得了稳定沉默TLR4的血管SMC。RT-PCR及Western blot证实RNA干扰TLR4基因后，SMC中TLR4 mRNA和蛋白表达均明显减低，其中pSilence2.1-siTLR4-1的抑制作用最强。结论成功构建了靶向TLR4基因的siRNA表达载体，并有效抑制血管SMC中TLR4表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李广平	天津医科大学第二医院心内科	316	1698	18.0	26.0
2	富华颖	天津医科大学第二医院心内科	29	85	6.0	7.0
3	崔丽	天津医科大学第二医院心内科	13	22	4.0	4.0
4	王兴华	天津医科大学第二医院心内科	3	4	1.0	2.0
5	焦占全	天津医科大学第二医院心内科	11	45	4.0	6.0