5种血浆游离DNA提取方法的比较

• 作者: 于杉 刘颖男 张桂珍 张琳 李秀英 杜珍武 杨麒巍 白金萍 赵冠杰
• 来源期刊: 中国体视学与图像分析
• 学科: 医学
• 关键词: 血浆游离DNA 酚-氯仿-异戊醇 DNA助沉剂 介孔纳米磁 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 生物医学
• 页码范围: 84-90
• 页数: 7页
• 分类号: R446.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.13505/j.1007-1482.2014.19.01.13

摘要

目的 分别应用5种方法进行血浆游离DNA的提取,从而判定与筛选最佳的血浆cfDNA提取方法.方法 采集19例健康人血浆标本,针对每一样本取350μl血浆分别应用经1次/2次酚-氯仿-异戊醇抽提法,经1次/2次酚-氯仿-异戊醇抽提配合微量DNA助沉剂法和介孔纳米磁珠法5种方法进行cfDNA提取,应用紫外分光法测定提取cfDNA的含量与纯度,应用实时荧光定量PCR方法以提取血浆cfDNA为模板进行扩增反应,以验证提取效果.结果 应用5种方法从19例350μ1血浆样本中提取的血浆cfDNA含量分别为(6971.43±1934.40) ng/ml、(2196.86±823.94) ng/ml、(12397.14±4197.37)ng/ml、(5568.29±1618.17) ng/ml和(7458.57±3706.83)ng/ml,A260/A280值分别为0.93±0.07、1.09±0.12、1.15 ±0.05、1.16±0.12和0.89±0.19,RT-qPCR扩增成功率为100％.结论 经1次酚-氯仿-异戊醇配合微量DNA助沉剂法提取量大,纯度高,所提取的血浆cfDNA可以为RT-qPCR提供模板,进行后续实验.