细胞外信号调节激酶/miR-133b在甲基苯丙胺致PC12细胞神经毒性的作用及机制

• 作者: 刘增训 刘海莉 吴金涛 岳庆伟 张静 朱德晓 李泽岩 李贵宝 王辉
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 甲基苯丙胺 miR-133b 细胞外信号调节激酶 磷酸化 神经毒性 PC12细胞 免疫印迹法 实时定量聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 神经生物学
• 页码范围: 755-760
• 页数: 6页
• 分类号: R741.02
• 字数: 4207字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-1356.2014.06.005

摘要

目的 探讨甲基苯丙胺(MA)致神经细胞毒性过程中细胞外信号调节激酶(ERK)和miR-133b的表达变化及调控机制.方法 用MA建立PC12神经细胞损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活性及镜下形态观察确定MA最佳损伤浓度;应用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平;通过Western blotting技术测定总ERK1/2和磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)的表达变化;并应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定miR-133b的表达变化.为进一步分析ERK/miR133b分子通路的作用关系,经U0126特异阻断ERK通路,检测miR-133b的表达变化.结果 给予不同浓度的MA,均可导致PC12细胞损伤,其中800μmol/L MA处理后,大部分胞体变圆,神经突起退缩,神经网络消失.MTT结果显示细胞活性明显下降.进一步的细胞毒性机制分析显示,MA处理后,细胞内ROS水平升高,p-ERK表达增高,miR-133b表达降低;并且给予ERK通路抑制剂U0126(10μmol/L)后,miR-133b表达升高,细胞活性增强,胞内ROS水平降低,镜下细胞损伤改善.结论 MA可通过上调ERK磷酸化抑制miR-133b表达,介导神经元毒性损伤.