莱茵衣藻缺铁应答基因Femu2p的克隆及原核表达

• 作者: 李亚军 罗秋兰 费小雯 邓晓东
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Femu2p 莱茵衣藻 重叠延伸PCR 基因克隆 原核表达 缺铁应答
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: Q786|Q946.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2014.06.0129-6

摘要

[目的]克隆莱茵衣藻缺铁应答基因Femu2p,构建重组表达载体pGEX-6p-1-Femu2p,优化条件使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.[方法]提取莱茵衣藻CC425的总RNA后,利用RT-PCR和两次重叠延伸PCR相结合的方法获得Femu2p的全长编码区,构建原核表达载体pGEX-6p-1-Femu2p,并将其转入大肠杆菌DL21 (DE3)中,利用IPTG诱导融合蛋白的表达并优化表达条件.[结果] Femu2p的全长编码区为2 904 bp,编码967个氨基酸,理论分子量为100.4 kDa,理论等电点为8.86.序列分析结果显示该蛋白属于包含多个C2 H2类型锌指结构域的RanBP2家族.IPTG诱导融合蛋白表达的最佳条件为:IPTG浓度0.25 mmol/L,诱导温度16℃,诱导时间8h.[结论]成功克隆了Femu2p基因的全长编码区,并使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.