人激活转录因子5基因真核表达载体的构建及其生物学功能研究

• 作者: 刘家宏 叶棋浓 吕朝晖 徐小洁 朱建华 王涛 田沛荣 符静 范忠义 陆菊明
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人激活转录因子5 真核表达 生物学功能
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.01.003

摘要

目的：构建带myc标签的人激活转录因子5（ATF5）的真核表达载体，获得myc-ATF5融合蛋白，并对其生物学功能进行初步检测。方法：以本实验室保存的带有XL5标签的ATF5质粒为模板，采用PCR技术扩增ATF5编码序列，将其插入pXJ-40-myc载体中，Western印迹检测其表达；将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞，通过Western印迹和qRT-PCR检测其下游基因哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在蛋白和mRNA水平的变化。结果：双酶切和测序结果表明myc-ATF5真核表达质粒构建成功，转染293T细胞后获得表达；Western印迹和qRT-PCR证明myc-ATF5可升高mTOR的转录和蛋白水平。结论：构建了带myc标签的人ATF5真核表达载体，为进一步研究ATF5在自噬中的功能奠定了基础。