Wnt3a对小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化的影响

• 作者: 干学东 张光宇 毕琳琳 王扬淦 王智泉 赵芳 陈明
• 来源期刊: 心脏杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎干细胞 心肌细胞 分化 Wnt3a
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R329.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13191/j.chj.2014.0028

摘要

目的:观察Wnt3a信号对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)心肌细胞分化的影响.方法:用悬滴培养法促进ESCs形成拟胚体(embryoid bodies,EBs).用免疫荧光染色法检测心肌特异性蛋白cTnT的表达.在不同分化时间加入Wnt3a及Wnt信号通路抑制剂Dkk-1观察对搏动EBs百分率的影响.用RT-PCR检测Nk同源异型盒5(Nkx2.5)、锌指转录因子-4(GATA-4)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)及心房钠尿肽(ANP)基因表达水平的变化.用Western blot检测cTnT表达水平的变化.将不加入Wnt3a,分化第0～5天及5～10天加入Wnt3a的组分别命名为对照组,D0-5组及D5-10组.加入Dkk-1的组命名为Dkk-1组.结果:通过悬滴培养法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT表达.EBs形成过程中即分化第0～5天加入Wnt3a与对照组相比具有更高的搏动EBs百分率,Nkx2.5、GATA4、β-MHC和ANP基因表达的水平,以及cTnT蛋白表达水平,而EBs形成后即分化第5～10天加入Wnt3a的结果相反.分化第5～10天加入Dkk-1与对照组相比具有更高的搏动EBs百分率及cTnT蛋白表达水平,并且在分化第0～5天分别加入Wnt3a及Dkk-1与单独加入Wnt3a及Dkk-1相比,搏动EBs百分率及cTnT蛋白表达水平更高.结论:Wnt3a对ESCs向心肌细胞分化的调控呈时间依耐性,EBs形成过程中激活Wnt3a信号及EBs形成后阻断Wnt3a信号能够获得更多的心肌细胞.