猪精原干细胞体外分离培养及诱导分化的研究

• 作者: 刘志永 卞桂华 庄勋 张蕾 施青青 李东 王霄燕 邱峰龙 陈庭锋
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 精原干细胞 体外培养 诱导分化 基因表达
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1104-1112
• 页数: 9页
• 分类号: S828|S814
• 字数: 6836字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.07.011

摘要

本研究旨在建立猪精原干细胞(Porcine spermatogonial stem cells,pSSCs)体外分离和诱导分化,并探索pSSCs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况.采用差速贴壁法分离pSSCs和支持细胞(Sertoli),采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性;传至3代后通过添加不同诱导剂,诱导SSCs向脂肪细胞、神经元样细胞和成骨细胞分化,并通过生化染色、qRT-PCR和免疫细胞化学检测诱导效果.结果表明:分离得到的pSSCs在饲养层上生长良好,碱性磷酸酶(AKP)及SOX2、integrinα6、SSEA1、Dazl抗体鉴定均呈阳性,表明SSCs处在未分化状态.诱导8d后,甲苯胺蓝染色及NSE抗体鉴定成阳性,成功诱导SSCs为神经元样细胞;诱导16d后,ALP、Von Kos-sa染色及Collagon l抗体鉴定均呈阳性,诱导SSCs为成骨细胞;诱导22 d后,油红O染色可见脂滴被染成红色,诱导SSCs成为脂肪细胞.在SSCs诱导过程中,qRT-PCR结果显示,Nestin和ptubulin在6d左右表达量最高,Cb凡1和Osterix在12 d左右表达量最高,PPARγ和C/EBPα在18 d左右表达量最高.本研究成功分离获得pSSCs,并且pSSCs可分别定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,表达细胞特有标记基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施青青	扬州大学动物科学与技术学院	11	63	4.0	7.0
2	王霄燕	扬州大学动物科学与技术学院	6	27	4.0	5.0
3	张蕾	扬州大学动物科学与技术学院	22	85	5.0	9.0
4	邱峰龙	扬州大学动物科学与技术学院	7	15	3.0	3.0
5	刘志永	扬州大学动物科学与技术学院	2	5	1.0	2.0
6	李东	扬州大学动物科学与技术学院	3	18	2.0	3.0
7	庄勋		6	15	3.0	3.0
8	陈庭锋	扬州大学动物科学与技术学院	5	7	2.0	2.0