集成核酸提取的实时荧光PCR微全分析系统

• 作者: 刘勇 堵棣威 张龙 朱灵 朱灿灿 李阳 王华东 王安 赵树弥 邓国庆
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 核酸提取 微全分析系统 实时荧光PCR 微流控芯片
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 研 究 报 告
• 页码范围: 1393-1399
• 页数: 7页
• 字数: 3805字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.140358

摘要

集成核酸提取的实时荧光PCR微全分析系统将核酸提取、PCR扩增与实时荧光检测进行整合，在同一块微流控芯片上实现了核酸分析过程的全自动和全封闭，具有试剂用量少、分析速度快、操作简便等优点。本研究采用微机械加工技术制作集成核酸提取微流控芯片的阳极模，使用组合模具法和注塑法制作具有3D通道的PDMS基片，与玻璃基底通过等离子体键合封装成集成核酸提取芯片。构建了由微流体速度可调节(0~10 mL/min)的驱动控制装置、温控精度可达0.1℃的TEC温控平台、CCD检测功能模块等组成的微全分析系统。以人类血液裂解液为样品，采用硅胶膜进行芯片上核酸提取。系统根据设置好的时序自动执行，以2 mL/min的流体驱动速度完成20μL裂解液上样、清洗；以1 mL/min的流体驱动速度完成DNA洗脱，抽取PCR试剂与之混合注入到反应腔。提取的基因组DNA以链上内参基因GAPDH为检测对象，并以传统手工提取为对照，在该系统平台上进行PCR扩增和熔解曲线分析实验。片上PCR扩增结果显示，扩增曲线明显， Ct值分别为25.3和26.9。扩增产物进行熔解曲线分析得到的熔解温度一致，均为89.9℃。结果表明，此系统能够自动化、全封闭的在微流控芯片上完成核酸提取、PCR扩增与实时定量分析。