内皮脂酶质粒pCMV-hEL584C→T的提取和初步鉴定

• 作者: 余智伟
• 来源期刊: 数字化用户
• 关键词: 内皮脂酶基因 质粒pCMV-HEL584C→T 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2014,（23）
• 所属期刊栏目: 综合论坛
• 页码范围: 258-258
• 页数: 1页
• 字数: 1231字
• 语种: 中文

摘要

目的：鉴定载有内皮脂酶基因的大肠杆菌质粒中是否含有目的基因pCMV-HEL584C→T，为进一步研究内皮脂酶基因对人脐静脉内皮细胞表达细胞粘附分子奠定基础；方法：选取载有内皮脂酶质粒基因pCMV-HEL584C→T大肠杆菌菌落进行复苏，利用在含有卡那霉素的LB平板培养基中进行筛选培养24至48小时，选取独立且较大的细菌菌落至含有卡那霉素的LB培养基中，在37℃、270rpm条件摇床，使菌体充分分裂增殖，通过质粒中提试剂盒使菌体裂解、并纯化提取菌体质粒DNA，使用0.7%琼脂糖凝胶在80V电压下电泳2小时，取出后在凝胶成像系统下观察所提取的质粒DNA条带，用超微量分光光度计检测质粒DNAOD值及含量。结果：通过与DL10000MarkerDNA对比，显示所提取质粒DNA条带为6000bp左右，脱氧核酸测定OD（A260/280）值为1.88，含量258.6ng/ul。结论：成功构建了内皮脂酶质粒基因pCMV-HEL584C→T，并且使大肠杆菌载有该质粒基因，核酸测定结果表明该质粒基因符合进一步转染要求。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余智伟		5	0	0.0	0.0