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microRNA抑制黑色素瘤VEGF基因表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响
microRNA抑制黑色素瘤VEGF基因表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响
作者:
孙建
蒋源
韩永智
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
黑色素瘤
microRNA
血管内皮生长因子
基因治疗
摘要:
[目的]研究外源性靶向microRNA对恶性黑色素瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的抑制作用,以及对癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响.[方法]根据VEGF基因序列人工设计合成4对microRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为:X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该四个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR检测转染细胞中VEGF基因的mRNA表达变化,Western Blot检测microRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的microRNA干扰序列.MTS和EDU法分别检测靶向VEGF的microRNA对SKmel-28生长的抑制作用,流式细胞仪观察转染对肿瘤细胞凋亡的影响,Transwell检测细胞侵袭和迁移能力变化.[结果]测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有统计学差异(P<0.05).抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1;MTS和EDU检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,与对照组相比有统计学差异(P<0.05),增殖抑制效应具有时间依赖性,细胞侵袭和迁移能力也显著减弱(P<0.01);流式细胞仪检测显示肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也显著高于对照组(P< 0.01).[结论]外源性靶向VEGF的microRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表达水平,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的体外增殖和侵袭迁移能力.
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文献信息
篇名
microRNA抑制黑色素瘤VEGF基因表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响
来源期刊
中山大学学报(医学科学版)
学科
医学
关键词
黑色素瘤
microRNA
血管内皮生长因子
基因治疗
年,卷(期)
2014,(2)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
207-214
页数
8页
分类号
R739.5
字数
4554字
语种
中文
DOI
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microRNA
血管内皮生长因子
基因治疗
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研究来源
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研究去脉
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期刊影响力
中山大学学报(医学科学版)
主办单位:
中山大学
出版周期:
双月刊
ISSN:
1672-3554
CN:
44-1575/R
开本:
大16开
出版地:
广州市中山二路74号
邮发代号:
46-141
创刊时间:
1980
语种:
chi
出版文献量(篇)
4645
总下载数(次)
6
总被引数(次)
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