检测三种烟草病毒的一步法多重RT-PCR

• 作者: 周小龙 宋纪真 张俊祺 李锋 杨军 王燃 罗朝鹏
• 来源期刊: 烟草科技
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草 病毒检测 一步法多重RT-PCR
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 病虫害防治
• 页码范围: 81-85
• 页数: 5页
• 分类号: S432.41
• 字数: 3653字
• 语种: 中文

摘要

一步法多重RT-PCR将反转录(Reverse transcription,RT)和聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)整合为一个步骤,能够在同一反应体系中同时扩增出多个目的片段.为使用一步法多重RT-PCR技术同时检测黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY),根据3种病毒基因组序列相对保守区域设计了3对特异性引物,并对RT-PCR的反应体系和反应条件进行了优化.优化结果显示,最终的多重RT-PCR反应特异性较高,且3个片段的扩增效率基本一致.田间样品的检测结果表明,一步法多重RT-PCR方法能够准确而快速地同时检测出3种病毒,优于酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA).