人GNAS1基因克隆、真核表达载体的构建及瞬时转染Hela细胞

• 作者: 刘建云 李兴暖 李卫东 汪涛 熊建军 王庭
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: GNAS1 基因克隆 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: Q781
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2014.04.0077

摘要

目的:克隆人GNAS1基因编码区序列、构建真核表达载体并瞬时转染Hela细胞.方法:通过RT-PCR克隆GNAS1基因编码序列,亚克隆至pMD19载体,测序鉴定正确后,通过酶切连接至真核表达载体pEGFP-N1,通过菌液PCR和酶切鉴定获得pEGFP-GNAS1重组质粒;表达载体以Lipofectamine2000介导转染Hela细胞,并用实时定量PCR检测外源基因在Hela细胞中的表达.结果:克隆到GNAS1基因并获得了pEGFP-GNAS1表达载体,在Hela细胞中获得了GNAS1的过量表达.结论:成功克隆了GNAS1基因编码序列,并构建其真核表达载体,瞬时转染至Hela细胞,为进一步深入研究Gsα蛋白生物学作用奠定基础.