印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤细胞的放射增敏作用及机制研究

• 作者: 刘均 李懿 李继聪 王运来 陈宏
• 来源期刊: 中华放射医学与防护杂志
• 关键词: 骨肉瘤 印记基因 PHLDA2 放射敏感性 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 放射生物学
• 页码范围: 267-270,278
• 页数: 5页
• 字数: 3643字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2014.04.007

摘要

目的 探讨印记基因PHLDA2过表达对骨肉瘤放射敏感性的影响及相关分子机制.方法 通过基因转染技术,将真核表达质粒pEGFP-C3-PHLDA2导入骨肉瘤U2OS细胞,经G418持续筛选获得稳定高表达PHLDA2蛋白的亚克隆细胞.实验分为3组:不转染的空白对照组,U2OS;稳定转染pEGFP-C3质粒的阴性对照组,U2OS-neo;pEGFP-C3-PHLDA2质粒的稳定转染组,U2OS-PHLDA2.采用CKK8比色法测定4和8 GyX射线照射后细胞的增殖活性;克隆形成实验观察0～8 Gy照射后细胞的存活能力;Annexin V/PI染色法检测8 Gy照射后的细胞凋亡;Western blot测定蛋白的表达变化.建立人骨肉瘤裸鼠移植瘤模型,观察10 Gy照射后PHLDA2基因的体内增敏效应.结果 经筛选获得的骨肉瘤亚克隆U2OS-PHLDA2细胞中PHLDA2蛋白表达上调(t=13.73,16.28,P＜0.05).与U2OS和U2OS-neo组相比,PHLDA2高表达组在4和8 Gy的增殖能力明显降低(t=5.00 ～ 8.23,P＜0.05),2～8 Gy的克隆形成能力明显降低(t=-2.52～-1.26,P＜0.05);同时照后裸鼠移植瘤的生长抑制作用显著提高(=3.27、2.91,P＜0.05).8 Gy照后,PHLDA2高表达组的凋亡率为(17.97±1.69)％,高于U2OS组的(6.47±1.01)％和U2OS-neo组的(7.15±0.96)％(t=10.11、9.61,P＜0.05);同时Caspase-3活性明显提高(t=11.26、10.72,P＜0.05).结论 外源性PHDLA2基因在U2OS细胞中稳定过表达能够提高骨肉瘤对X射线的敏感性,其机制可能是通过增强Caspase-3的活性、促进射线诱导的细胞凋亡作用实现的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王运来	解放军总医院放疗科	51	198	9.0	10.0
2	刘均	成都军区昆明总医院肿瘤科	37	91	5.0	6.0
3	陈宏	成都军区昆明总医院肿瘤科	68	275	9.0	12.0
4	李懿	成都军区昆明总医院肿瘤科	11	46	3.0	6.0
5	李继聪	成都军区昆明总医院肿瘤科	2	1	1.0	1.0