Tat-Vp3融合蛋白在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达与纯化及其促凋亡功能的研究

• 作者: 刘芸 姜勇 李翠 罗海华 谭婷
• 来源期刊: 感染、炎症、修复
• 关键词: 细胞穿透肽 民凋亡素 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 增殖率 凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 字数: 5250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8521.2014.01.002

摘要

目的：采用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获取可溶性 His-Tat-Vp3融合蛋白,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法：构建重组质粒 pFastBacTM1-TAT-VP3,转化DH10Bac 感受态细胞,获得杆状病毒质粒,转染 Sf9昆虫细胞,得到重组杆状病毒,纯化并扩增该病毒。用最适滴度的病毒刺激 Sf9细胞以诱导 His-Tat-Vp3蛋白表达,经 SDS-PAGE和 Western bolt鉴定,获得分子质量约21 kDa 的融合蛋白。采用 MTT 实验与流式细胞技术检测500、1000、2000 nmol/L的融合蛋白抑制肿瘤细胞(HeLa细胞)增殖及促凋亡的活性。结果：通过昆虫表达系统成功表达及纯化出Tat-Vp3融合蛋白,其中1000、2000 nmol/L融合蛋白组可显著抑制肿瘤细胞的增殖,并提高细胞的凋亡率。结论：成功构建 His-TAT-VP3融合蛋白昆虫系统表达载体,在昆虫表达系统中可诱导性可溶性高表达,所获融合蛋白能显著抑制 H eLa细胞的增殖,并促进其凋亡。