miR-196b慢病毒表达载体的构建和功能鉴定

• 作者: 刘玥 宋艳斌 尹虹 帅春 马文丽
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: miR-196b 慢病毒表达载体 载体构建
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 674-678
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 2528字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带miR-196b的慢病毒表达载体,为研究miR-196b在慢性粒细胞白血病中的功能及其对慢粒发生发展的作用奠定基础.方法 以人骨髓细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-196b的前体序列,慢病毒表达载体plVTHM构建重组载体plVTHM-miR-196b,并包装病毒和进行滴度测定.用病毒液感染K562细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,用流式细胞仪分选感染后绿色荧光蛋白阳性的K562细胞,再用实时荧光定量PCR测定细胞内miR-196b的表达水平.最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况.结果 成功构建了plVTHM-miR-196b慢病毒表达载体;载体中绿色荧光蛋白有较好的表达活性;与对照组细胞相比,试验组miR-196b表达水平有显著提升(P＜0.05); K562细胞稳定过表达miR-196b后增殖水平显著下降(P＜0.05).结论 成功构建了miR-196b过表达载体,并在K562细胞内稳定高表达,miR-196b有抑制K562细胞增殖的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马文丽	南方医科大学基因工程研究所	275	1255	15.0	23.0
2	刘玥	南方医科大学基因工程研究所	15	19	3.0	4.0
3	尹虹	南方医科大学基因工程研究所	6	15	3.0	3.0
4	宋艳斌	南方医科大学基因工程研究所	32	167	7.0	11.0