shRNA转基因猪中miRNA通路饱和引起的早期致死性

• 来源期刊: 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）
• 学科: 生物学
• 关键词: 致死性 shRNA转基因克隆猪 microRNA通路 猪瘟病毒 囊胚发育
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: Articles
• 页码范围: 466-473
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 语种: 英文
• DOI: 10.1631/jzus.B1400001

摘要

研究目的：通过制备抗猪瘟病毒shRNA转基因猪，探索shRNA对猪胎儿成纤维细胞、克隆猪早期胚胎发育以及转基因猪的影响。<br>　　创新要点：基于稳定表达 shRNA 的猪胎儿成纤维克隆细胞及 shRNA 转基因克隆猪制备的结果，发现shRNA 对克隆猪早期囊胚发育阶段无明显毒性，并首次报道了在 shRNA 转基因动物中， shRNA引起体内miRNA通路过饱和及动物致死性等毒性。<br>　　研究方法：实验构建了多种抗猪瘟病毒shRNA表达载体，转染猪胎儿成纤维细胞并筛选得到细胞克隆，结合体细胞核移植技术制备了shRNA转基因猪。使用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）和蛋白质印迹法（Western blotting）检测了细胞及个体水平siRNA的表达量、干扰素反应相关基因、内源miRNA及通路因子的表达量，同时检测了shRNA克隆细胞囊胚率。<br>　　重要结论：shRNA能有效抑制猪瘟病毒的复制。在猪胎儿成纤维细胞水平上，稳定表达shRNA能引起细胞内干扰素反应、miRNA通路过饱和等副作用；在克隆猪发育阶段，shRNA对克隆猪早期囊胚发育阶段无明显毒性；在shRNA转基因克隆猪个体水平上，shRNA引起克隆猪体内miRNA通路过饱和及克隆猪早期易致死等毒性。