疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在大肠杆菌中的表达与纯化

• 作者: 张守涛 时健 王慧 王烃 郝兵 郭国光
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌 疏棉状嗜热丝孢菌 脂肪酶 表达 纯化 环化
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 31-36
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2014.04.0082

摘要

目的:实现疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus Lipase,TLL)在大肠杆菌中的可溶性表达,并建立有效的纯化方法.方法:根据疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶序列和大肠杆菌密码子的偏爱性,合成了疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶DNA序列,克隆至大肠杆菌表达载体PET-32a(+)中,通过筛选得到阳性重组载体,并转化入大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并利用SDS-PAGE电泳检测重组脂肪酶表达情况,并通过Ni柱亲和层析对目的蛋白TLL进行纯化,透析脱盐后,TEV酶切重组融合蛋白,再利用亲和层析纯化得到酶切后的脂肪酶,检测其酶活.结果:得到了可溶性表达的TLL,检测酶切前后脂肪酶的比活性:酶切前达5.7×106U/mg,酶切后达8.9×105U/mg.结论:实现了疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的可溶性表达,并得到有效纯化,同时证明TEV酶切目的蛋白对其活性影响微小,为之后对其进行环化打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王慧		21	97	6.0	9.0
2	张守涛		18	65	5.0	7.0
3	王烃		1	0	0.0	0.0
4	郭国光		1	0	0.0	0.0
5	时健		1	0	0.0	0.0
6	郝兵		1	0	0.0	0.0