SELEX筛选骨肉瘤HER2适配体方法的建立

• 作者: 张鹏 徐又佳 李光飞 沈光思 陈孜
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: SELEX技术 骨肉瘤 HER2 DNA适配体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法研究
• 页码范围: 703-706,709
• 页数: 5页
• 分类号: R446.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201405028

摘要

目的 应用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与HER2特异性结合的寡聚核酸适配体(aptamer).方法 体外合成了长度为78个碱基并含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库,通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法制备次级ssDNA文库,且经以微孔为介质的SELEX正反筛法获得了与HER2特异性结合的DNA适配体;同时利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力,将亲和力最高的适配体群进行克隆、测序.最后利用生物学软件DNAMAN对适配体群进行了一级结构和二级结构的分析,同时将亲和性最高的适配体做了进一步的特异性的检验.结果 经过12轮的筛选,获得了与HER2蛋白具有极高亲和力的适配体9号,亲和力从初始的0.18上升至o.86,提高了约5倍.特异性结果显示,9号适配体只与HER2具有较高的特异性.结论 经过多轮的筛选,成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤的诊断和治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐又佳	苏州大学附属第二医院骨科	260	1688	20.0	25.0
2	张鹏	苏州大学附属第二医院骨科	117	617	15.0	20.0
3	李光飞	苏州大学附属第二医院骨科	20	105	7.0	9.0
4	沈光思	苏州大学附属第二医院骨科	31	230	8.0	13.0
5	陈孜	苏州大学附属第二医院骨科	1	1	1.0	1.0