猪流行性腹泻病毒COE基因在毕赤酵母中的表达及生物活性分析

• 作者: 丁小玲 丁维民 张小飞 徐延伟 李吕木 胡青松 许发芝
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 COE基因 毕赤酵母表达 中和活性
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1342-1347
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4144字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.020

摘要

旨在利用毕赤酵母表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,及研究COE蛋白免疫小鼠后产生抗体的中和病毒的能力.根据PEDV S糖蛋白基因设计引物,取患猪流行性腹泻病(PED)的仔猪肠道组织,抽提PEDV的总mRNA,进行RT PCR扩增,获得PEDV部分保护性抗原基因(COE基因)片段.进一步将COE基因导入毕赤酵母表达载体,构建毕赤酵母表达质粒pPIC9K-COE重组质粒,并电转化入酵母感受态细胞GS115中,筛选高拷贝阳性重组菌进行诱导表达.利用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白及其免疫原性,病毒中和试验评价重组蛋白免疫小鼠后血清抗体的病毒中和能力.RT PCR扩增获得大小为530 bp的PEDV COE基因,该基因在毕赤酵母表达载体中能够正确表达,SDS-PAGE结果显示毕赤酵母表达的COE蛋白大小在27 ku左右,分泌表达量约30 mg·L-1.Western blot表明PEDV COE重组蛋白具有反应原性.中和试验结果表明,PEDV COE重组蛋白免疫小鼠后血清中特异性抗体具有中和活性,中和效价为1:36,而对照则小于1:2.PEDV COE基因可在毕赤酵母中获得分泌表达,且表达的蛋白具有很好的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李吕木	安徽农业大学动物科技学院	119	864	16.0	23.0
2	许发芝	安徽农业大学动物科技学院	35	160	8.0	10.0
3	张小飞		33	213	8.0	13.0
4	丁小玲	安徽农业大学动物科技学院	34	206	8.0	13.0
5	胡青松	安徽农业大学动物科技学院	3	17	3.0	3.0
6	徐延伟		5	31	3.0	5.0