三种DNA抽提方法对新鲜血细胞及冻血细胞DNA抽提效能的比较

• 作者: 吴洪玉 朱玲 朱艳平 李兆申 满晓华 金晶 高军 龚燕芳
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: DNA抽提 外周血 血细胞 DNA质量
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 101-105
• 分类号: R446.71
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2014.00101

摘要

目的 比较3种血细胞DNA提取方法(进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚抽提方法)对新鲜血细胞及冻血细胞DNA的提取效率及差异.方法 收集20例胰腺癌患者5 mL外周血标本,经低速离心获得血细胞沉淀后分装,根据保存方式分为新鲜血细胞和冻血细胞.新鲜血细胞不经冻存,在12 h内迅速抽提DNA;冻血细胞在-40℃保存72 h后,室温解冻后抽提DNA.抽提方法分别采用进口试剂盒(Qiagen公司)、国产试剂盒(天根生化科技有限公司)和改良苯酚方法.琼脂糖电泳检测DNA片段的完整性,核酸蛋白检测仪测定DNA纯度和浓度,计算不同抽提方法的DNA得率.结果 在获得的DNA完整性方面,改良苯酚方法抽提的基因组DNA断裂和降解较少,而进口和国产试剂盒抽提的DNA均有一定程度的降解小片段.在获得DNA的纯度方面,部分冻存血细胞无论应用进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚方法,均表现出一定的污染杂峰.在DNA得率方面,无论新鲜血细胞和冻存血细胞,均是进口试剂盒得率最高,其次为国产试剂盒;冻血细胞的改良苯酚法DNA得率与国产试剂盒相当,新鲜血细胞的改良苯酚法DNA得率最低.在耗时和成本分析中,试剂盒较快但成本较高.结论 改良苯酚抽提法可获得较进口和国产试剂盒片段更长、更完整的基因组DNA,虽然在得率和耗时方面稍逊色,但其成本较低,可推荐用于大规模、分批次、低成本冻存血细胞的基因组DNA抽提.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兆申	第二军医大学长海医院消化内科	1030	7581	34.0	55.0
2	龚燕芳	第二军医大学长海医院消化内科	120	602	12.0	17.0
3	吴洪玉	第二军医大学长海医院消化内科	26	35	3.0	3.0
4	满晓华	第二军医大学长海医院消化内科	92	537	10.0	19.0
5	高军	第二军医大学长海医院消化内科	91	287	9.0	10.0
6	金晶	第二军医大学长海医院消化内科	47	145	7.0	8.0
7	朱玲	上海体育学院中国乒乓球学院	19	47	4.0	5.0
8	朱艳平	第二军医大学长海医院消化内科	3	10	2.0	3.0