卵母细胞生发泡破裂(GVBD)发生前后脱卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟的影响

• 作者: 刘明兰 张春林 李科瑛 雷安民
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 猪 卵丘-卵母细胞复合体 体外成熟
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 专题:动物干细胞与胚胎工程
• 页码范围: 1090-1096
• 页数: 7页
• 字数: 4812字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.09.005

摘要

成熟卵母细胞的细胞质对供体细胞的重编程有作用,卵母细胞的成熟状态成为核移植过程的关键因素.为了研究卵母细胞体外成熟过程中卵母细胞生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)发生前后脱卵丘细胞对卵母细胞的影响,本研究采用猪(Sus scrofa)卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)于体外培养,每隔5h取卵母细胞采样,置于地衣红染液中染色,根据卵母细胞染色体构型的变化确定卵母细胞的分期,然后在21、27和42 h的卵母细胞进行脱卵丘细胞处理,观察极体数.体外培养不同时间压片观察结果表明,直径2～6 mm卵泡卵母细胞在体外培养时,2～17 h大部分卵母细胞处于GV期(88.30％～52.38％); 22 h有63.25％的卵母细胞处于生发泡破裂至前中期(germinal vesicalbreakdown～premetaphase Ⅰ,GVBD～pre-M Ⅰ);27 h处于中期Ⅰ(metaphase Ⅰ,MⅠ)的卵母细胞最多(42.25％); 32 h处于后期Ⅰ(anaphase Ⅰ,AⅠ)的卵母细胞比例最多(29.90％); 37 h处于末期Ⅰ(telophase Ⅰ,TⅠ)的卵母细胞比例最多(40％);42 h绝大部分卵母细胞达到了中期Ⅱ(metaphaseⅡ,MⅡ)(72.81％).分别采取21、27和44 h的卵母细胞进行脱卵丘细胞处理,发现21h脱卵丘细胞后卵母细胞成熟率为25.56％,低于27 h处理卵的成熟率(34.33％),42 h脱卵丘细胞的卵母细胞的成熟率最高达到84.33％.结果说明,体外卵母细胞成熟过程中,卵丘细胞对卵母细胞的成熟具有重要意义,为进一步探讨和分析猪卵母细胞体外成熟培养的方法,改良体外培养体系,提高猪卵母细胞体外培养成熟率,进而提高胚胎体外培养质量提高奠定基础.