人支气管上皮hsa-miR-148a-3p低表达细胞株的建立

• 作者: 刘庆成 刘建军 夏菠 徐新云 杨淋清 柯跃斌 毛侃琅 谢杏
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 医学
• 关键词: hsa-miR-148a-3p DNA甲基转移酶1 16HBE细胞 慢病毒
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 204-208,212
• 页数: 6页
• 分类号: R73-36
• 字数: 3951字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.03.010

摘要

目的：建立稳定的hsa-miR-148a-3p低表达人支气管上皮细胞株(16HBE)。方法：根据miRBase中提供的序列信息设计hsa-miR-148a-3p tough decoy RNA(TuD RNA)，并将其连接到慢病毒载体pLKO.1-puro上。将重组慢病毒载体转染至293FT细胞并包装为慢病毒后，收集病毒上清，感染正常16HBE细胞。用嘌呤霉素筛选出has-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞株，通过荧光定量PCR对其进行鉴定，然后对筛选出的细胞分别采用荧光定量PCR和Western blot检测DNA甲基转移酶1(DNMT1) mRNA和蛋白的表达水平。结果：测序结果表明含hsa-miR-148a-3p TuD RNA的重组慢病毒载体构建成功；荧光定量PCR检测显示has-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞株has-miR-148a-3p的表达量比正常16HBE细胞低44%(P<0.01)，其作用靶基因DNMT1的mRNA和蛋白表达水平分别为正常细胞的3.4倍和2.0倍(P均<0.01)。结论：成功建立hsa-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞，hsa-miR-148a-3p的低表达能提高DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平。