鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究

• 作者: 孙永珍 崔红玉 王云峰 赵妍
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: ILTV gC蛋白 多克隆抗体 细胞定位 功能
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1309-1316
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 5780字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.015

摘要

为制备对鸡传染性喉气管炎具有诊断应用价值的抗体,并研究鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) gC蛋白在LMH细胞内的分布及gC蛋白对病毒在细胞间传播过程中的作用,本研究以ILTV-LJS09毒株基因组为模板,应用PCR方法扩增gC基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建pET-32a-gC质粒,经IPTG诱导表达并纯化,获得His gC重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清.Western blot结果表明,所制备的兔抗-ILTV gC抗体能与纯化的His-gC蛋白发生特异性反应且能检测到内源性gC蛋白.间接免疫荧光试验结果表明,所制备的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多抗能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298毒株反应,特异性良好.采用获得的抗gC抗体观测LJS09-gC蛋白在LMH细胞内的分布,发现gC蛋白主要存在于病毒感染细胞的胞质和胞膜上,细胞核和未感染的细胞中没有gC蛋白.利用抗体中和ILTV gC蛋白的试验结果表明,gC蛋白可能直接参与病毒在细胞间传播,从而影响病毒蚀斑的形成.本研究成功制备了具有诊断价值的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多克隆抗体,并证实LJS09 gC蛋白在分布及功能上具有α疱疹病毒的保守性,为gC蛋白生物学特性和ILTV感染机制的研究提供了重要数据.