HGF/Met通路对肝癌细胞株MHCC97-H干细胞样表型的影响

• 作者: 于泳 刘杰 张卓超 李侠 王德盛 窦科峰 阮柏 黄启科
• 来源期刊: 中华消化外科杂志
• 关键词: 肝肿瘤 肝细胞生长因子 Met 多能干细胞
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 352-357
• 页数: 6页
• 字数: 4431字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-9752.2013.05.007

摘要

目的 观察HGF/Met通路对肝癌细胞株MHCC97-H干细胞样表型的影响,探讨其可能的作用机制.方法 体外培养肝癌细胞株Huh7和MHCC97-H,采用细胞免疫荧光染色技术筛选高表达Met的肝癌细胞株MHCC97-H,将其分为4组:空白组(不做处理)、HGF刺激组(50 μg/L HGF)、抑制组(50 μg/LHGF+1 mol/L HGF抑制剂PHA665752)和表皮生长因子(EGF)/成纤维细胞生长因子(FGF)刺激组(50 μg/L HGF+ 20μg/L EGF+ 20 μg/L FGF).Western blot检测前3组MHCC97-H细胞中Met和磷酸化Met(p-Met)蛋白的表达.培养24 h后光镜下观察前3组细胞形态学变化.克隆球形成实验检测4组细胞克隆球形成能力.荧光实时定量PCR检测空白组和HGF刺激组不同时间点(2、4、8、16、24 h)MHCC97-H细胞中多能干细胞相关基因表达变化.计量资料采用x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析和重复测量的方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 细胞免疫荧光染色检测结果显示:肝癌细胞株MHCC97-H与Huh7细胞比较,前者高表达Met,将其作为后续研究对象.Western blot检测结果显示:空白组、HGF刺激组和抑制组细胞中Met蛋白的相对表达量分别为0.44±0.04、0.37 ±0.03和0.41 ±0.04,3组比较,差异无统计学意义(F=2.31,P＞0.05).而3组细胞中p-Met蛋白的相对表达量分别为0.020±0.010、0.070±0.020和0.010±0.000,3组比较,差异有统计学意义(F=34.11,P＜0.05),其中HGF刺激组p-Met蛋白的表达水平高于空白组和抑制组(t=3.87,5.20,P＜0.05).HGF刺激组MHCC97-H细胞形态呈现长梭状间质样改变,而抑制组和空白组细胞形态相似,呈上皮样.克隆球形成实验结果表明:空白组、HGF刺激组、抑制组和EGF/FGF刺激组克隆球数目分别为0、(35.0±6.3)个、(4.3±1.5)个和(54.3±2.5)个,4组比较,差异有统计学意义(F =511.28,P＜0.05),其中HGF刺激组克隆球数目多于空白组和抑制组(t=9.62,8.21,P＜0.05),而少于EGF/FGF刺激组(t=4.93,P＜0.05).实时定量PCR检测结果显示:空白组和HGF刺激组不同时间点(2、4、8、16、24 h)C-myc mRNA相对表达量分别为1.00±0.11、1.68±0.09、1.08 ±0.24、1.18 ±0.13、0.78 ±0.14、1.06±0.04; Klf4 mRNA分别为1.00±0.20、1.43 ±0.16、0.87±0.28、1.19 ±0.29、2.17 ±0.43、1.41 ±0.06;Oct4mRNA分别为1.00±0.12、0.54±0.12、0.69 ±0.19、1.08±0.12、1.62 ±0.30、0.97 ±0.11,空白组和HGF刺激组不同时间点上述各指标比较,差异均有统计学意义(F=13.64,8.52,13.56,P＜0.05);HGF刺激组2 h C-myc mRNA相对表达量达到峰值,与空白组比较,约升高了1.68倍(t=8.29,P＜0.05),HGF刺激组16 h Klf4 mRNA相对表达量达到峰值,与空白组比较,约升高了2.17倍(t=4.27,P＜0.05),HGF刺激组16 h Oct4 mRNA相对表达量达到峰值,与空白组比较,约升高了1.62倍(t=3.32,P＜0.05).结论 HGF/Met通路的活化能够诱导肝癌细胞MHCC97-H的干细胞样表型转化,其可能作用机制是通过增加多能干细胞相关基因的表达而实现的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘杰	第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科	58	407	11.0	16.0
2	李侠	第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科	63	249	8.0	11.0
3	王德盛	第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科	60	426	11.0	18.0
4	黄启科	第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科	9	47	4.0	6.0
5	阮柏	第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科	9	42	4.0	6.0
6	张卓超	第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科	14	41	4.0	5.0
7	于泳	第四军医大学西京医院肝胆胰脾外科	1	6	1.0	1.0