兰州鲇（CAG）n、（GATA）n微卫星文库构建与鉴定

• 作者: 吴旭东 张利平 王发新 肖伟 赛清云 连总强 魏大为
• 来源期刊: 淡水渔业
• 学科: 农学
• 关键词: 兰州鲇(Silurus lanzhouensis) 磁珠富集 微卫星
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 15-20
• 页数: 6页
• 分类号: S917.4
• 字数: 4030字
• 语种: 中文

摘要

应用磁珠富集法构建兰州鲇（ Silurus lanzhouensis） CAG重复和GATA重复的微卫星文库，并分析其序列特征。兰州鲇基因组DNA经MseI酶切，选取200～800 bp的片段与生物素标记的探针（CAG）8和（GATA）6杂交，捕获到含有微卫星序列的目的DNA片段连接到pMD19-T载体，转化到大肠杆菌DH5α菌株中构建微卫星富集文库，经PCR检测筛选出阳性克隆进行测序。从126个阳性克隆中随机选取96个进行测序，获得59个微卫星序列（ GenBank登录号： KJ545973～KJ545998， KJ598088～KJ598120）。其中完美型31个（52.54％）、非完美型20个（33.9％）、混合型为8个（13.56％）。根据侧翼序列，成功设计48对引物，选取25对微卫星引物在10个个体进行扩增与多态性筛选，共获得10对多态性引物。结果表明，经优化的磁珠富集法能够高效地获得兰州鲇微卫星标记，这些标记将为兰州鲇种质资源保护、微卫星连锁图谱构建、经济性状的QTL定位及分子标记辅助选育奠定基础。